为验证方法的可行性,进一步对饮料样品进行加标试验。在此过程发现,直接向各类饮料中加入索马甜,均无法检出,分析其原因可能是由于各类饮料中高浓度的糖含量引起蛋白聚沉所导致的,因此,加标回收试验均是在对饮料进行10倍稀释后的基础上添加。不同样品的索马甜加标试验超高效液相色谱结果如图4所示,索马甜加标回收率及精密度试验结果见表1。
根据表1结果,不同样品索马甜加标回收率在82.8%~102.3%,相对标准偏差均在6%以内,表明该方法具有良好的准确度和重复性。
2、SDS-PAGE分析方法的建立
SDS-PAGE是分析蛋白质常用的方法,能够实现定性及半定量分析。配制不同浓度的索马甜蛋白水溶液,其SDS-PAGE结果如图5所示。
由图5可以看出,索马甜蛋白条带超过20kD,与文献中报道的分子量22kD大小吻合,随着浓度的增大条带颜色逐渐加深、条带变宽,其中浓度为10mg/L时,蛋白条带隐约可见,浓度为增加至25mg/L时,条带已更加清晰、明显,由此可见,SDS-PAGE法满足GB2760-2014最大允许使用量0.025g/kg的分析要求。
对各类饮料进行10倍稀释后随机添加不同浓度索马甜标准溶液,按照前述的电泳分析方法进行处理并电泳,其结果如图6所示。由图中可以看出,各加标样品电泳条带与索马甜标准样品一致,由此可见利用SDS-PAGE法能够实现对饮料中索马甜进行分析。
三、结论
本论文分别基于超高效液相色谱法和SDS-PAGE法建立了饮料中索马甜的分析测试方法。通过样品加标实验,结果表明两种方法均可实现对饮料中索马甜的检测,其灵敏度都可满足GB2760-2014中最大限值使用的检测要求。此外,对于较为复杂的基质样品,通过采用两种方法进行相互佐证,能够获得更为可靠的结果。
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